准备试剂与收集血样:
PCR荧光定量检测试剂盒1.收集标本:血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,避免反复冻融。
2.标准品液配制:使用前加入0.5ml蒸馏水混匀,配成1200ng/ml的溶液。设标准管8管,管加标本稀释液900ul,第二至第八管加入标本稀释液500ul。在管中加入1200ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。
3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。
4.洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序:
1.加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
2.洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
3.每孔中加入抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
4.洗板:同前。
5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
6.洗板:同前。
7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗处反应15分钟。
8.每孔加入100ul终止液混匀。
9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
性能:
1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2.灵敏度:检测浓度小于0.1U/mL。
3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5.贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6.有效期:6个月
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PCR荧光定量检测试剂盒的检测程序